I dette nye kapitel i den episke saga 300 bevæger kamp for dominans til en ny slagmark: havet. Græske General Themistokles er sat mod de invaderende persiske tropper, som tilbeder Gud og konge Xerxes og ledet af den hævngerrige mester Artemisia. For at bekæmpe dem skal Themistokles Unite Grækenland og lede angrebet, der ændrer forløbet af krigen.